วิธีประเมิน SS-31 คุณภาพผงเปปไทด์: รายการตรวจสอบ HPLC, LC-MS และ COA

เมื่อจัดหาเปปไทด์เกรด SS-31 ในการวิจัย -ตัวเลขความบริสุทธิ์พาดหัวเพียงอย่างเดียวจะทำให้เห็นภาพคุณภาพของวัสดุที่ไม่สมบูรณ์ การยืนยันตัวตน ปริมาณเปปไทด์ โปรไฟล์สิ่งเจือปน และการตรวจสอบย้อนกลับแบบแบทช์ ล้วนมีอิทธิพลต่อความเหมาะสมสำหรับการใช้งานเชิงทดลอง

คู่มือนี้จะอธิบายวิธีประเมินคุณภาพเปปไทด์ SS-31 สิ่งที่ HPLC และ LC-MS วัดได้จริง วิธีตีความใบรับรองการวิเคราะห์ (COA) และสิ่งที่ควรคำนึงถึงเมื่อเปรียบเทียบซัพพลายเออร์

วัสดุเปปไทด์ที่มีคุณสมบัติไม่ดีสามารถนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ทำซ้ำไม่ได้ ความแปรปรวนของการทดลอง และความล่าช้าของโครงการที่มีค่าใช้จ่ายสูง ความเสี่ยงที่สำคัญ ได้แก่ :

เปปไทด์ที่ระบุไม่ถูกต้องหรือลำดับไม่ถูกต้อง

โปรไฟล์สิ่งเจือปนที่มีอิทธิพลต่อการทดลองระดับเซลล์หรือในสัตว์ทดลอง

ความคาดหวังด้านความบริสุทธิ์ที่ไม่ตรงกันระหว่างซัพพลายเออร์

ชุดงานไม่ดี-ถึง-ความสอดคล้องกันของชุดงาน

สำหรับการวิจัยในไมโตคอนเดรีย ซึ่งความแตกต่างเล็กน้อยในคุณภาพของเปปไทด์อาจส่งผลต่อผลการทดลอง การตรวจสอบถือเป็นข้อกำหนดเบื้องต้นสำหรับวิทยาศาสตร์ที่สามารถทำซ้ำได้ แทนที่จะเป็นขั้นตอนเสริม

ปริมาณความบริสุทธิ์และเปปไทด์ของ HPLC มีความสัมพันธ์กัน แต่มีคุณลักษณะด้านคุณภาพที่แตกต่างกัน ไม่ควรถือว่าใช้แทนกันได้เมื่อประเมินผงเปปไทด์ SS-31

โดยทั่วไปความบริสุทธิ์ของ HPLC คำนวณจากพื้นที่พีคของโครมาโตกราฟีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบที่ระบุ โดยแสดงให้เห็นความสัมพันธ์ของพีคหลักกับโครมาโตแกรมแบบรวม ผลลัพธ์จะขึ้นอยู่กับวิธีการแยก สภาวะการตรวจจับ กฎการรวม และสิ่งเจือปนที่ตรวจพบโดยวิธีการ จะไม่เทียบเท่ากับเปอร์เซ็นต์ของ SS-31 โดยน้ำหนักโดยอัตโนมัติ

การทดสอบเปปไทด์หรือเนื้อหาจะอธิบายปริมาณของเปปไทด์เป้าหมายที่รายงานบนพื้นฐานการวิเคราะห์ที่กำหนดไว้ ขึ้นอยู่กับวิธีการ ผลลัพธ์อาจแสดงเป็นได้รับ แบบไม่มีน้ำ หรือแบบตอบโต้-แบบอิสระ ต้องระบุเกณฑ์การคำนวณก่อนจึงจะสามารถเปรียบเทียบผลลัพธ์ได้อย่างมีความหมาย

ผงที่มีความบริสุทธิ์ของ HPLC 98% ไม่จำเป็นต้องประกอบด้วย SS-31 98% โดยน้ำหนัก น้ำ ปฏิกิริยาตอบโต้ ตัวทำละลายตกค้าง และส่วนประกอบอื่นๆ อาจส่งผลต่อความสัมพันธ์ระหว่างความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟีกับปริมาณของเปปไทด์ในวัสดุ

เมื่อเปรียบเทียบซัพพลายเออร์หรือคำนวณความต้องการวัสดุ ให้ขอวิธี HPLC และโครมาโตแกรม ผลการทดสอบเปปไทด์ หากมี และข้อความที่ชัดเจนเกี่ยวกับพื้นฐานการทดสอบ อย่าเปรียบเทียบเปอร์เซ็นต์ที่รายงานโดยตรง เว้นแต่วิธีการและฐานการคำนวณจะเปรียบเทียบได้

โครมาโตกราฟีของเหลว-แมสสเปกโตรเมทรี (LC-MS) วัดมวลโมเลกุลของส่วนประกอบที่ถูกชะออกมา

สำหรับ SS-31 น้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยทางทฤษฎีของรูปแบบเบสอิสระ-จะอยู่ที่ประมาณ 639.8 กรัม/โมล ข้อมูล LC-MS ควรได้รับการตีความโดยใช้อัตราส่วนมวลต่อประจุ-ที่สังเกตได้ สถานะประจุ และการกำหนดไอออนที่คาดหวัง แทนที่จะโดยการเปรียบเทียบพีคดิบจุดเดียวโดยตรงกับน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย

การจับคู่มวลสนับสนุนเอกลักษณ์ของโมเลกุลที่นำเสนอ แต่ไม่ได้สร้างลำดับกรดอะมิโนที่สมบูรณ์ โครงสร้างสเตอริโอเคมี หรือการไม่มีสิ่งเจือปนในโครงสร้างทั้งหมดอย่างอิสระ ในกรณีที่จำเป็นต้องมีการประกันเอกลักษณ์ที่เข้มงวดมากขึ้น ให้ทบทวนสเปกตรัมมวลสนับสนุนและพิจารณาวิธีการวิเคราะห์มุมฉากเพิ่มเติมที่เหมาะสมกับวัสดุและการประยุกต์ใช้ในการวิจัยที่ตั้งใจไว้

ควรยืนยันรูปแบบทางเคมีที่ให้มาและพื้นฐานที่ใช้ในการรายงานการทดสอบหรือเนื้อหา โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อเปรียบเทียบค่าอ้างอิงฐานอิสระ-กับวัสดุที่มีรูปแบบเกลือ-

ใบรับรองการวิเคราะห์เฉพาะชุด-เป็นเอกสารคุณภาพหลัก COA ควรได้รับการประเมินเป็นบันทึกคุณภาพเฉพาะชุด- ไม่ใช่เพียงเป็นเอกสารที่มีการกล่าวอ้างที่มีความบริสุทธิ์สูง ใช้รายการตรวจสอบต่อไปนี้เพื่อประเมิน COA:

ในกรณีที่รายงานสรุปไม่ได้ให้รายละเอียดเพียงพอ โปรดขอโครมาโตกราฟี แมสสเปกตรัม วิธีการวิเคราะห์ หรือรายงานผลการทดสอบที่เกี่ยวข้อง

การทดสอบเพิ่มเติมอาจเกี่ยวข้องโดยขึ้นอยู่กับการใช้งานของคุณ:

ตัวทำละลายตกค้าง- เกี่ยวข้องกับการเพาะเลี้ยงเซลล์และการศึกษาในสัตว์ทดลอง

โลหะหนัก- เกี่ยวข้องกับงานใน vivo และบริบทด้านกฎระเบียบบางประการ

ปริมาณความชื้น/การต่อต้าน- เกี่ยวข้องกับการจ่ายยาที่แม่นยำและความเข้ากันได้ของบัฟเฟอร์

การทดสอบเอนโดท็อกซิน / ความเป็นหมัน- จำเป็นสำหรับแอปพลิเคชันใน vivo เฉพาะเท่านั้น ไม่ใช่คุณสมบัติมาตรฐานของเปปไทด์เกรดการวิจัย-ทั้งหมด

ข้อกำหนดในการทดสอบขึ้นอยู่กับการใช้งานที่ต้องการและความเสี่ยงด้านคุณภาพที่เกี่ยวข้อง การทดสอบเอนโดท็อกซินและการทดสอบความเป็นหมันเป็นการประเมินที่แตกต่างกัน และไม่ควรถือว่าใช้แทนกันได้ การกล่าวอ้างความเป็นหมันหรือเอนโดทอกซินต่ำควรได้รับการสนับสนุนโดยวิธีการทดสอบ เกณฑ์การยอมรับ และผลลัพธ์เฉพาะกลุ่ม- ในกรณีที่จำเป็น สถานะเกรดการวิจัย-เพียงอย่างเดียวไม่ได้สร้างความเหมาะสมสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ การศึกษาในสัตว์ทดลอง หรือการใช้งานเฉพาะทางอื่นๆ

อย่าถือว่าการทดสอบทั้งหมดรวมอยู่ด้วยโดยค่าเริ่มต้น ขอเฉพาะเอกสารที่เกี่ยวข้องกับการใช้งานที่คุณต้องการ และยืนยันว่ามีการทดสอบเพิ่มเติมหรือไม่

สังเกตสัญญาณเตือนเหล่านี้:

ไม่มีหมายเลขแบทช์หรือวันที่ผลิต

เฉพาะตัวเลขความบริสุทธิ์พาดหัวที่ไม่มีวิธีทดสอบ

ไม่มีความแตกต่างระหว่างขีดจำกัดข้อกำหนดและผลลัพธ์จริง

เทมเพลตทั่วไปไม่เฉพาะเจาะจงกับ SS-31

หมายเลขชุดบน COA ไม่ตรงกับบรรจุภัณฑ์

ชื่อผลิตภัณฑ์ หมายเลข CAS หรือน้ำหนักโมเลกุลไม่สอดคล้องกันในเอกสารต่างๆ

เมื่อเปรียบเทียบซัพพลายเออร์ ให้ประเมินมากกว่าแค่ราคาต่อกรัม:

วิธีการยืนยันตัวตนและข้อมูลสนับสนุน

การทดสอบความบริสุทธิ์และพื้นฐานการคำนวณ (HPLC เทียบกับการทดสอบ เกรดที่แตกต่างกันไม่สามารถเปรียบเทียบได้โดยตรง)

ความพร้อมใช้งานของเอกสารเฉพาะชุด-

บันทึกการติดตามความสอดคล้องกันเป็นชุด-ถึง-

ความสามารถในการทดสอบเพิ่มเติม

ระยะเวลาดำเนินการ บรรจุภัณฑ์ และเงื่อนไขการจัดส่ง

การสนับสนุนด้านเทคนิคและนโยบายการแก้ไขปัญหาด้านคุณภาพ

การเปรียบเทียบที่มีความหมายมากที่สุดคือต้นทุนต่อมิลลิกรัมของเปปไทด์ที่ออกฤทธิ์ พร้อมเอกสารคุณภาพที่เทียบเคียงได้

ความบริสุทธิ์ของ HPLC 99% หมายถึงปริมาณเปปไทด์ 99% หรือไม่

ไม่ ความบริสุทธิ์ของ HPLC คือการวัดค่าโครมาโตกราฟีแบบสัมพัทธ์ ปริมาณเปปไทด์ตามน้ำหนักจริงอาจแตกต่างกันเนื่องจากความชื้น สารเติมแต่ง และตัวทำละลายตกค้าง และขึ้นอยู่กับเกณฑ์การคำนวณที่ใช้

HPLC เพียงอย่างเดียวสามารถยืนยันตัวตน SS-31 ได้หรือไม่

ไม่ HPLC วัดเวลาการเก็บรักษาและการตอบสนองของรังสียูวี LC-MS ให้ข้อมูลน้ำหนักโมเลกุลตั้งฉากเพื่อสนับสนุนการคัดกรองเอกลักษณ์ แต่ไม่มีวิธีการใดเพียงอย่างเดียวที่ถือเป็นการยืนยันโครงสร้างที่สมบูรณ์

COA SS-31 ควรมีอะไรบ้าง

COA ที่สมบูรณ์ควรประกอบด้วยการระบุผลิตภัณฑ์ หมายเลขชุด ความบริสุทธิ์ของ HPLC พร้อมวิธีทดสอบที่ระบุ ข้อมูลการระบุตัวตน LC-MS หากมี การทดสอบเปปไทด์ หากมี วันที่ทดสอบ และลายเซ็น QA

เหตุใด COA จึงควรตรงกับแบทช์ที่ให้มา

ผลลัพธ์ใช้กับชุดการผลิตเฉพาะเท่านั้น COA ทั่วไปหรือ COA จากชุดงานอื่นไม่รับประกันคุณภาพของวัสดุที่คุณได้รับ

การทดสอบโดยบุคคลที่สาม-จำเป็นเสมอหรือไม่

ไม่จำเป็น. ผู้ผลิตที่มีชื่อเสียงหลายรายจัดทำเอกสารใน-การควบคุมคุณภาพของบริษัท สิ่งสำคัญคือวิธีการได้รับการจัดทำเป็นเอกสาร ติดตามได้ และสม่ำเสมอ การทดสอบโดยบุคคลที่สาม-เพิ่มการตรวจสอบอีกชั้นสำหรับแอปพลิเคชันที่มีความเสี่ยงสูง-

การประเมินคุณภาพอย่างเข้มงวดเป็นส่วนหนึ่งของการวิจัย SS{2}}31 ที่มีความรับผิดชอบ ความบริสุทธิ์ของ HPLC, การคัดกรองเอกลักษณ์ของ LC-MS, การทดสอบเปปไทด์ และการตรวจสอบย้อนกลับเป็นชุด ล้วนเป็นองค์ประกอบสำคัญของคุณสมบัติของซัพพลายเออร์

สำหรับคำแนะนำในการจัดหาและกรอบการเปรียบเทียบซัพพลายเออร์ โปรดดูบทความของเราเกี่ยวกับวิธีการจัดหาผงเปปไทด์ SS-31 สำหรับข้อมูลจำเพาะของผลิตภัณฑ์และเอกสารประกอบสำหรับแบทช์ โปรดไปที่หน้าผลิตภัณฑ์ผงเปปไทด์ SS-31

ผับเคม.อีลามิเพรไทด์. รหัสประจำตัวประชาชน 11764719.

สำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาของสหรัฐอเมริกาคำแนะนำสำหรับอุตสาหกรรม: เปปไทด์สังเคราะห์. 

ข้อควรพิจารณาด้านกฎระเบียบและการวิเคราะห์สำหรับการประเมินคุณภาพของยาเปปไทด์วารสารสืบสวนเภสัชกรรม.